| Echantillons pour la coupe en paraffine | Uniquement les coupes (c'est dans le nom) |
| Fixateurs de la coupe en paraffine | Méthanol, éthanol
Mélange méthanol + acide acétique
Formol
Liquide de Boin : formol + acide picrique |
| Etapes de l'inclusion de la coupe en paraffine | - Déshydratation (bains d'alcool 70/95/100°)
- Solvant du milieu d'inclusion : TOLUENE
- Milieu d'inclusion : Paraffine (57/60°) ou Paraplast (50°) |
| Coupe de l'échantillon inclus en paraffine | - Coupes en ruban de 3 à 5 μm avec un microtome à avance mécanique
- Dépôt sur une lame de verre pré-gélatinée + goutte d'eau
- Séchage sur platine chauffante à 37° |
| Colorations topographiques pour la coupe en paraffine | - H, HE, HES
- Trichrome de Masson
- MGG : sang
- Papanicolaou : frottis
- Imprégnation argentique : architecture du TN
- Crésyl violet : neurones |
| Colorations signalétiques des composants cellulaires pour la coupe en paraffine | - PAS : mucine, glycogène, glycoprotéines
- Tétrachrome d'Herlant-Racadot : glycoprotéines de cellules hypophysaires |
| Colorations signalétiques des composants tissulaires pour la coupe en paraffine | - PAS : membrane basale
- Imprégnation argentique : fibres de réticuline
- Fuchsine résorcine ou orcéine : fibres élastiques |
| Montage non aqueux de la coupe en paraffine | - Déshydratation avec des bains d'alcool (70/95/100°)
- Solvant
- résine + lamelle |
| Montage aqueux de la coupe en paraffine | - Glycérine + agent de conservation
- Pose de lamelle |
| Echantillons pour la congélation in vivo | Tout mais pas de cellules vivantes |
| Fixateurs de la congélation in vivo | Méthanol, éthanol
Mélange méthanol + acide acétique
Formaldéhyde ou paraformaldéhyde
PAS DE LIQUIDE DE BOIN |
| Etapes de l'enrobage pour la coupe en congélation | - Echantillon mis dans une cryoprotecteur
- Bain d'isopentane à -80°
- Bain d'azote liquide à -196° |
| Coupe de l'échantillon congelé in vivo | - Coupes de 20 μm PAS EN RUBAN avec le cryostat rotatif à avance mécanique dans une enceinte à -20°
- Dépôt sur une lame de verre pré-gélatinée puis séchage à T° ambiante
- Stockage à -80° |
| Colorations topographiques d'une coupe en congélation | - HES ou TM
- Crésyl violet
- Thionine
- Bleu de toluidine, bleu de méthylène |
| Colorations signalétiques pour une coupe en congélation in vivo | - Les classiques (PAS, orcéine ou FR, imprégnation argentique)
- Mise en évidence des lipides : Oil red O/Noir Soudan/Bleu de Nil |
| Montage d'une coupe en congélation in vivo | Montage aqueux car un montage non aqueux dissout les lipides (à cause de l'alcool) |
| Echantillons pour un examen en extemporané | PAS de cellules vivantes, ni autopsie, ni pièces opératoires après chirurgie |
| Fixation pour un examen en extemporané | PAS de fixation (gain de temps !) |
| Inclusion pour un examen en extemporané | Enrobage comme pour la coupe en congélation :
- Cryoprotecteur
- Bain d'isopentane à -80°
- Bain de N2 à -196° |
| Coupe pour un examen en extemporané | Pareil que pour la coupe en congélation
- Cryostat rotatif à avance mécanique, enceinte à -20°, 20 μm
- Dépôt sur une lame de verre pré-gélatinée, séchage à T° ambiante
- Stockage à -80° |
| Colorations topographiques pour un examen en extemporané | Pareil que pour la coupe en congélation
- HES ou TM
- Crésyl violet, thionine
- Bleu de toluidine, Bleu de méthylène |
| Colorations signalétiques pour un examen en extemporané | Pareil que pour la coupe en congélation
- Les classiques : PAS, orcéine ou FR, imprégnation argentique
- Mise en évidence des lipides : Oil red O/Noir Soudan/Bleu de Nil |
| Montage pour un examen en extemporané | Montage très succinct, aqueux ou à sec |
| Echantillons pour une coupe en résine en ME | Toute forme d'échantillons hospitaliers en coupe |
| Fixateurs pour une coupe en résine en ME | - Glutaraldéhyde
- Osmium ou acide osmique ou OsO4
- Mélange glutaraldéhyde + osmium + paraformaldéhyde |
| Etapes d'inclusion pour une coupe en résine en ME | - Déshydratation avec des bains d'alcool (70/95/100°)
- Bains de solvant = oxyde de propylène
- Inclusion dans la résine Epoxy, Araldite, Epon à 60° |
| Coupe d'un échantillon inclus en résine | - Ultramicrotome à avance thermique : coupes de 50 à 100 nm
- Les coupes flottantes sont placées sur la grille de nickel ou d'or pour l'analyse in situ et de cuivre pour la morphologie |
| Coloration pour une coupe en résine en ME | PAS de coloration mais CONTRASTE après avoir enlevé la résine
- Citrate de plomb : membrane
- Acétate d'uranyle : acides nucléiques |
| Montage pour une coupe en résine en ME | PAS de montage |
| Différentes techniques des études in situ des constituants biochimiques | - Histochimie sur des coupes en paraffine ou en congélation
- Histoenzymologie en extemporané ou congelé, ou sur des cellules vivantes issues de cultures in vitro |
| Différentes techniques des analyses moléculaires in situ | - Immunocytohistologie en MO et en ME : marquage direct sur l'anticorps primaire ou indirect sur l'anticorps secondaire
- Hybridation in situ en MO et en ME |
| Différentes méthodes utilisées en histochimie | - PAS (Periodic Acid & Schiff) : l'acide périodique fait des aldéhydes à partir des glycols des glucides puis le réactif de Schiff colore les aldéhydes en rouge
- Feulgen Rossenbeck : HCl : l'acide chlorhydrique (HCl) fait des aldéhydes sur les désoxyriboses (hydrolyse ménagée de l'ADN) puis le réactif de Schiff colore les aldéhydes en rouge
→ Mise en évidence de la polyploïdie dans certaines cellules tumorales |
| Fonctionnement de l'histoenzymologie | On décèle les activités enzymatiques et pas les enzymes elles-mêmes, uniquement en MO, sans fixation
- On met l'échantillon en présence d'un substrat de l'enzyme pour donner de l'H2O2
- La présence d'H2O2 colore un donneur d'électrons |
| Différentes méthodes de l'immunocytohistologie | - Fluorochrome couplé à un anticorps (IgG) tel que FITC (fluorescéine), TRICT (rhodamine), Texas Red
- Enzyme couplée à un anticorps (même fonctionnement que l'histoenzymologie sauf que ça marche avec toutes les techniques (paraffine, résine...))
- Or colloïdal : sur IgG en MET |
| Fonctionnement de l'hybridation in itu | Détection des séquences d'ADN et des transcrits d'ARNm
- Sondes chaudes : isotopes radioactifs : révélation par autoradiographie
- Sondes froides : fluorescentes |
