| ¿Qué medidas de bioseguridad debe conocer y tener siempre presente para preparar soluciones en el laboratorio de Biología Molecular? | - Usar guantes para manipular las soluciones
- Usar barbijo (de ser necesario), bata cerrada y zapatos cerrados.
- No usar alhajas
- Limpiar las mesadas con alcohol al 70% o lavandina al 10%
- Usar materiales limpios y/o esterilizados
- Las micro pipetas deben ser limpiadas con alcohol al 70% antes de comenzar. |
| ¿A partir de que células de la sangre conseguirá obtener ADN? | Glóbulos blancos |
| ¿Qué compuestos le ayudarían a romper la membrana plasmática de los glóbulos blancos para obtener ADN? | Sales (aporta cationes que ayudan a romper la membrana) o Detergentes (forman micelas con los lípidos de la membrana) |
| ¿Para qué sirven los componentes de la Lisis de Glóbulos Blancos? | Tris: es un tampón biológico que ayuda a mantener el pH de la solución constante.
EDTA: es un agente quelante de iones quelantes que inhibe la acción de las nucleasas.
NaCl: las sales aumentan el poder iónico de la solución y ocasionan la precipitación del ADN. Y evita la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN.
SDS: solubiliza las proteínas evitando que una cantidad significativa de ADN quede atrapada en los desechos o restos celulares. |
| ¿Qué efecto provoca la Proteinasa K? | La Proteinasa K digiere las proteínas en péptidos que son más fáciles de extraer y actúa a una temperatura de 60°C a 65 °C. |
| Luego de incubación generalmente el protocolo involucra (purificación) podrías decirle que reactivos debe usar. | Proteinasa K, solventes orgánicos (fenol y cloroformo) y sales de alta concentración. |
| ¿Para qué necesita el alcohol isopropilico? Y ¿Cómo continúa el protocolo luego que se lo agrega la muestra? | El alcohol isopropilico se usa para deshidratar ADN y precipitarlo. Se usa en la Precipitación del ADN. Luego continúa el lavado, secado y la rehidratación. |
| ¿A qué porcentaje se debe preparar su gel de agarosa? | 1% |
| ¿Cómo se prepara el gel de agarosa? | Se prepara la agarosa al 1% en el buffer TBE 0,5% dentro de un Erlenmeyer, se funde a baño maría o en horno microondas hasta obtener una solución pura, transparente y homogénea.
Se deja enfriar y se agrega el GelRed.
Se vierte la agarosa al soporte de corrida y se coloca el peine.
Se deja que la solución gelifique.
Cuando la agarosa este sólida, se retiran los selladores, se inserta el soporte en la cuba, se llena con el buffer de corrida TBE 0,5x y luego se retira el peine. |
| ¿Qué buffers tendrá que utilizar para realizar la electroforesis que pretende? | TBE 10X y TAE 10X |
| ¿Por qué es importante mantener una temperatura menor a 30 °C durante la electroforesis? | Para evitar que el gel se disuelva nuevamente afectando la electroforesis y desnaturalizando el ADN. |
| ¿Qué diferencia existe entre un gel más concentrado o menos concentrado? | La diferencia es que en un gel más concentrado se va a dar mayor fragmentación del ADN que un gel menos concentrado. |
| ¿Que se necesita para sembrar la muestra de ADN en el gel? | Necesita mezclar la muestra con el buffer de carga para darle densidad a la muestra, color y para que la muestra se deposite directamente en el pocillo. |
| ¿A qué se llama frente de corrida? | Es el colorante o buffer de carga que se usa para visualizar el avance sobre el gel. |
| ¿Por qué se usa el azul de bromofenol y para qué es el bromuro de etidio o GelRed? | El azul de bromofenol se usa para dar densidad, color a la muestra y para que la misma se deposite en pocillo;
y el bromuro de etidio o gelred se usa para teñir a los ácidos nucleicos. |
| ¿Qué necesito realizar para poder visualizar la corrida y por qué? | Para visualizar la corrida debo exponer el gel a luz UV para poder analizar las bandas. |
| Para qué sirve el acetato de potasio? | Hace que las proteínas precipiten pudiendo ser concentradas por centrifugación y eliminadas fácilmente, se utiliza para la purificación del ADN |
| Para qué se utiliza el etanol? | Elimina cualquier resto de solvente del ADN, se usa en el lavado de pellet. |
| En qué paso de la extracción de ADN se provoca la deshidratación de la molécula? | La deshidratación se provoca en la Precipitación del ADN. |
| ¿Qué compuesto/s se utiliza en la precipitación del ADN? | Isopropanol |
| ¿Antes de almacenar el ADN que deberá hacer? Y ¿Dónde se almacena? | Antes de almacenar el ADN, se debe hacer un lavado y secado del pellet y por ultimo una rehidratación. Se almacena en freezer a - 20 °C y si es por tiempo prolongado a – 8 °C. |
